viernes, 14 de diciembre de 2018

Técnicas de edición genómica en neumonía por Streptococcus pneumoniae

Biblioteca CRISPRi neumocócica: El estudio de 348 genes potencialmente esenciales de Streptococcus pneumoniae mediante el sistema CRISPRi inducible por IPTG (tiogalactopiranósido), a través de clonación por infusión se obtuvo aproximadamente un 89% de sgARN positivos. En este estudio se utilizó la cepa D39, se subclonó el gen dcas9sp en el plásmido pJWV102 con el promotor inducible IPTG P Iac, después se integró en el locus bgaA de Streptococcus pneumoniae D39, por otro lado se determinó en condiciones in vitro e in vivo. 
Los resultados de este sistema pueden ser utilizados para explicar la interacción huésped-microbio, además proporciona el descubrimiento de dianas farmacológicas.

Construcción y análisis de crecimiento de la biblioteca CRISPRi

Referencias bibliográficas:



viernes, 7 de diciembre de 2018

Terapia regenerativa en neumonía por Streptococcus pneumoniae

Durante la neumonía neumocócica el citoplasma de las células epiteliales ciliadas pulmonares indican una mayor expresión de ARNm que codifica la proteína MIWI2 (regula las respuestas inmunes innatas del pulmón durante una infección pulmonar) de Piwi, la expresión de MIWI2 se localizó exclusivamente en vías aéreas conductoras. En este estudio las células madre pluripotenciales inducidas fueron generadas a partir de los ratones Knock-triples, Miwi/Mili/Miwi2 se diferenciaron en las tres capas germinales. Por otro lado, esta proteína MIWI2 marca una subpoblación de células multiciliadas en las vías aéreas de humanos y de ratón.

Células madre de la región alveolar del ratón y su papel de respuesta frente a la lesión


Referencias:



sábado, 1 de diciembre de 2018

Un ejemplo de transgénico vegetal o animal en neumonía por Streptococcus pneumoniae

Ejemplo de transgénico animal 
En este estudio se utilizó un modelo de ratón CCL2 transgénico infectado con Streptococcus pneumoniae (productor de neumolisina) cuya respuesta al ataque se encontró en las células epiteliales alveolares de tipo II (CCL2 tg) con el desarrollo de lesiones profundas de característica OP, neumonía organizada, que afectan a los bronquiolos periféricos y alvéolos aproximadamente siete días después de la infección. Por otro lado se investigó los factores relacionados con la inflamación expresados tanto en humanos como en el ratón trangénico: TGFB1/tgfb1, TIMP1/timp1, entre otros. 
De esta manera se comparó las lesiones histopatológicas, además se analizó la expresión génica vinculada con la fibrosis en compartimientos pulmonares individuales en ratones CCL2 humanos y transgénicos. 


Lesiones presentes en neumonía organizada teñidas con hematoxilina y eosina. En ratones transgénicos (a,b y c) y en pulmones OP humanos (d, e y f).
Ventajas:
1. Mediante la creación de animales trangénicos se permite el estudio de las diversas fases de una determinada enfermedad.
2. En la producción animal y el campo biosanitario.
3. Mejora de avances en lo que respecta al transplante de órganos.
4. En la agricultura con la creación de plantas transgénicas resistentes a insecto-plagas y patógenos.
5. Producción de biofármacos a partir de fluidos corporales animales. Por ejemplo el cerdo.

Desventajas:
1. Manipulación de genes en un organismo conlleva a potenciar, silenciar o alterar las proteínas.
2. En lo que respecta a los alimentos transgénicos existe una posible generación de alergias y toxicidad.
3. Objeciones éticas implicadas en los distintos países.
4. En los xenotransplantes se puede producir reacciones hiper-agudas de rechazo al injerto.
5. Podría existir riesgos a largo plazo al vincularse los transgénicos con el medio ambiente.

Referencias: 


sábado, 24 de noviembre de 2018

Ejemplo de ADN recombinante: en la naturaleza y uno artificial en neumonía por Streptococcus pneumoniae

1. Ejemplo de ADN recombinante en la naturaleza
La transferencia horizontal de genes, es una forma de recombinación homóloga de las bacterias, consiste en tomar ADN del exterior e incorporarlo a su material genético. Por otro lado, este acontecimiento ocurre en el hábitat natural de Streptococcus pneumoniae, la nasofarínge. En poblaciones mixtas de Streptococcus pneumoniae cuyo crecimiento se produce en la superficie epitelial suelen formar un biofilm, estas biopelículas contienen grandes cantidades de ADN de tal manera que podrían competir con cualquier ADN liberado durante los ataques de tipo fratricida. 
Se ha demostrado altos índices de transferencia de genes en lo que respecta a las biopelículas neumocócicas. 

Competencia para la transformación genética natural en S. pneumoniae, El principal interruptor regulador consiste en cinco proteínas (ComABCDE) que juntas conforman un sistema.


2. Ejemplo de ADN recombinante artificial

Para que Streptococcus pneumoniae sobreviva es necesario que se adapte a las intervenciones clínicas, es por ello que la variación genómica es un mecanismo fundamental para la adaptación al entorno del huésped. El estrés producido por los antibióticos induce a la competencia en el neumococo, es decir durante la fase de competencia Streptococcus pneumoniae adquiere ADN exógeno de esta forma incluye genes que confieren resistencia a los antibióticos, los reemplazos de recombinación se encuentran en los genes de las proteínas de unión a la penicilina (PBP). Por otro lado al mutarse los genes PBP se presenta resistencia a los β-lactámicos: amoxicilina, penicilina y cefotaxima.





Referencias:

sábado, 17 de noviembre de 2018

Prueba molecular microarray para el patógeno respiratorio Streptococcus pneumoniae


La diversidad en los patrones de antígenos neumocócicos ha permitido la realización de un microarray de proteoma constituido por aproximadamente 2,000 proteínas pertenecientes al neumococo, además de los 208 anticuerpos fuertemente vinculados a seres humanos adultos. Resulta fundamental la caracterización de la respuesta inmune frente a las proteínas neumocócicas para entender los aspectos epidemiológicos y de vacunación, es por ello que la prueba de microarray de proteoma ha revelado la gran afinidad que presenta la inmunoglobulina IgA por los antígenos potenciales (alrededor de 2,190) de  Streptococcus pneumoniae.


Referencias:

domingo, 11 de noviembre de 2018

Prueba de Reacción en cadena de polimerasa en neumonía por Streptococcus pneumoniae

T: Detección de ADN neumocócico en sangre mediante la reacción en cadena de polimerasa
O: Investigar el rendimiento de la PCR en muestras de sangre para el diagnóstico de neumonía neumocócica en niños.
M: sangre; extracción: usando el mini kit QIAamp DNA blood 
AN: ADN genómico
G: gen de la autolisina lyt A: 927 pb
PCR: PCR cuantitativa en tiempo real
V: no especifica
SA: > 6.9 log 10 copias / mL 
EA: 88% a 99% 



Asociación entre la carga de la reacción en cadena de la polimerasa neumocócica (PCR) (log 10copias / ml) en muestras nasofaríngeas / orofaríngeas (NP / OP) y de sangre total (WB)



Referencias: 
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5447841/

viernes, 2 de noviembre de 2018

Prueba de tamizaje y confirmatoria para neumonía por Streptococcus pneumoniae

Prueba de tamizaje: Radiografía del tórax (CXR)
En el manejo clínico corresponde una herramienta fundamental para el diagnóstico de neumonía en la población infantil, la organización mundial de la salud estableció una metodología optima, consiste en realizar la toma de la imagen en formato antero-posterior o postero-anterior. Por otra parte, para la interpretación estandarizada de CXR, en lo que respecta a los resultados se toma como referencia: la consolidación (opacidad densa que ocupa parte del pulmón, otro infiltrado (densidades lineales, con engrosamiento peribronquial), derrame pleural (presencia de líquido en el espacio pleural), imprimible (se refiere a características de la imagen que no son interpretables). 


Prueba confirmatoria: Reacción de Quellung o prueba de Neufeld
Es un método para la confirmación y el serotipo de Streptococcus pneumoniae, consiste en probar la suspensión de células de neumococo mediante la utilización de una pequeña cantidad de antisueros combinados y específicos dirigidos en contra del polisacárido capsular. La visualización de las reacciones antígeno-anticuerpo se realiza microscópicamente con un aumento de 400x. Este protocolo consta de tres pasos:
1. En la preparación se realiza la suspensión de células bacterianas
2. En un portaobjetos de vidrio se mezcla las células junto con el antisuero
3. Con ayuda de un microscopio se realiza la lectura de la reacción de Quellung

Reacción de Quellung negativa y positiva. Las preparaciones de aislado de neumococo serotipo 9V sin antisuero ( 1A ) y con antisuero del grupo 9 ( 1B ), se observaron con un aumento de 400X. Este último muestra la "hinchazón" y el redondeo de las células bacterianas que se ven típicamente en una reacción de Quellung positiva


Referencias: